中國(guó)人群EB病毒(Epstein-Barr virus)血清學(xué)陽(yáng)性率高達(dá)95%以上，絕大部分屬于潛伏感染。當(dāng)全身或局部免疫力低下時(shí)，可引起EB病毒的再激活，導(dǎo)致EB病毒機(jī)會(huì)性感染。IBD患者腸道局部炎癥刺激和免疫抑制劑的使用，易導(dǎo)致EB病毒重激活并加重病情。腸道EB病毒感染的診斷及其對(duì)IBD病情發(fā)展的影響日益受到關(guān)注。結(jié)腸黏膜活組織檢查(以下簡(jiǎn)稱活檢)標(biāo)本中EB病毒感染檢測(cè)是確定腸道EB病毒感染的主要方法。為統(tǒng)一腸道EB病毒感染的組織標(biāo)本檢測(cè)及判讀方法，并進(jìn)一步規(guī)范腸道EB病毒感染的臨床病理診斷，中華醫(yī)學(xué)會(huì)消化病學(xué)分會(huì)消化病理協(xié)作組組織專家進(jìn)行了腸道病理組織EB病毒感染檢測(cè)質(zhì)量控制和EB病毒感染意義共識(shí)討論會(huì)，對(duì)EB病毒感染的檢測(cè)方法、判讀、計(jì)數(shù)和臨床病理意義等開(kāi)展廣泛討論并達(dá)成共識(shí)。
一、腸道黏膜活檢取材
腸道EB病毒感染時(shí)，病毒在黏膜組織中分布不均，潰瘍處病毒負(fù)荷顯著高于非潰瘍黏膜，為確定有無(wú)EB病毒感染，內(nèi)鏡活檢取材部位應(yīng)重點(diǎn)位于潰瘍處。但是初診患者或診斷不明的患者，為明確診斷，內(nèi)鏡活檢應(yīng)為系統(tǒng)性活檢，上消化道活檢部位應(yīng)包括食管、胃體、胃竇和十二指腸，下消化道活檢部位應(yīng)包括回腸末端、盲腸、升結(jié)腸、橫結(jié)腸、降結(jié)腸、乙狀結(jié)腸和直腸，取材應(yīng)取潰瘍旁黏膜組織，避免只在潰瘍底部取材。
二、EB病毒感染檢測(cè)方法
EB病毒感染檢測(cè)方法包括原位雜交、PCR和免疫組織化學(xué)技術(shù)。原位雜交檢測(cè)EB病毒編碼的小RNA(Epstein-Barr virus-encoded RNA, EBER)在EB病毒潛伏期和病毒復(fù)制期均大量存在于感染細(xì)胞的細(xì)胞核內(nèi)，EBER原位雜交可在組織切片確定EB病毒感染細(xì)胞及其在組織中的定位。PCR可定量檢測(cè)EB病毒DNA，但無(wú)法確定感染細(xì)胞及其在組織中的定位，常用于檢測(cè)外周血EB病毒負(fù)荷。免疫組織化學(xué)法可檢測(cè)EB病毒表達(dá)蛋白質(zhì)，包括EB病毒核抗原和潛伏膜蛋白，這些蛋白質(zhì)分別在病毒感染的不同時(shí)期表達(dá)。免疫組織化學(xué)法僅能檢測(cè)病毒蛋白質(zhì)表達(dá)階段，對(duì)于細(xì)胞內(nèi)EB病毒低拷貝的檢測(cè)靈敏性差。上述方法中EBER原位雜交具有高度靈敏性和特異性，組織定位明確，是檢測(cè)EB病毒感染的金標(biāo)準(zhǔn)。本共識(shí)推薦腸道EB病毒感染檢測(cè)統(tǒng)一采用EBER原位雜交。
三、EBER原位雜交及顯色方法
目前常用的EBER原位雜交試劑分別有適用于手工和全自動(dòng)免疫組織化學(xué)染色儀兩種類型的試劑盒，在規(guī)范操作規(guī)程下，手工操作和全自動(dòng)免疫組織化學(xué)染色儀操作可達(dá)到類似的染色效果。
常用的顯色方法包括DAB顯色和氯化硝基四氮唑/5-溴-4-氯-3-吲哚-磷酸二鈉鹽(nitro-blue-tetrazolium chloride/5-bromo-4-chloro-3-indonyl phosphate，NBT-BCIP)顯色。DAB顯色陽(yáng)性信號(hào)著色為棕褐色，蘇木精復(fù)染細(xì)胞核呈藍(lán)色。NBT-BCIP顯色陽(yáng)性信號(hào)著色為深藍(lán)色，核固紅復(fù)染細(xì)胞核呈淡紅色。DAB和NBT-BCIP兩種顯色方法相比較，DAB顯色方法更清晰、穩(wěn)定，蘇木精襯染對(duì)細(xì)胞結(jié)構(gòu)的顯示清晰，DAB-蘇木精組合更符合病理醫(yī)師閱片習(xí)慣。NBT-BCIP在組織中陽(yáng)性信號(hào)不易受背景干擾，識(shí)別特異性高，但陽(yáng)性信號(hào)不穩(wěn)定，易被洗脫導(dǎo)致信號(hào)丟失。DAB和NBT-BCIP兩種顯色方法各有優(yōu)勢(shì)，只要陽(yáng)性信號(hào)定位清晰、明確，背景非特異著色無(wú)或很輕，對(duì)判斷陽(yáng)性信號(hào)無(wú)影響，均可采用。
四、組織處理及設(shè)立對(duì)照
送檢組織標(biāo)本應(yīng)用10%中性甲醛溶液及時(shí)固定，最佳固定時(shí)間為8～12 h。采用新鮮蠟塊，盡量不使用2年以上的蠟塊。待測(cè)組織切片后應(yīng)盡快進(jìn)行原位雜交檢測(cè)，室溫中放置的切片需在1周內(nèi)完成檢測(cè)。
每例原位雜交檢測(cè)都應(yīng)設(shè)置陽(yáng)性對(duì)照、標(biāo)本質(zhì)量對(duì)照和空白對(duì)照。陽(yáng)性對(duì)照：以鼻咽癌組織切片進(jìn)行原位雜交檢測(cè)。標(biāo)本質(zhì)量對(duì)照：一般采用針對(duì)U6細(xì)胞核小RNA的Oligo探針，對(duì)待檢組織切片進(jìn)行原位雜交檢測(cè)，出現(xiàn)所有細(xì)胞核陽(yáng)性，則證明待測(cè)組織標(biāo)本RNA保存良好，適合進(jìn)行原位雜交檢測(cè)?？瞻讓?duì)照：以PBS代替探針，對(duì)待檢組織切片進(jìn)行原位雜交檢測(cè)。在各種因素影響下無(wú)法常規(guī)實(shí)現(xiàn)以上3種對(duì)照時(shí)，本共識(shí)建議至少設(shè)立陽(yáng)性對(duì)照與空白對(duì)照。
五、EBER原位雜交的判讀
判讀時(shí)首先應(yīng)確定陽(yáng)性對(duì)照是否定位正確，清晰易辨，Oligo探針對(duì)照(即標(biāo)本質(zhì)量對(duì)照)彌漫陽(yáng)性，空白對(duì)照無(wú)細(xì)胞著色。對(duì)照組織切片染色結(jié)果理想，才可對(duì)待檢組織切片進(jìn)行判讀。當(dāng)對(duì)照組織切片染色不理想時(shí)，待檢組織切片的結(jié)果不可靠，應(yīng)仔細(xì)查找原因，并重新檢測(cè)。
六、計(jì)數(shù)方法
①選擇陽(yáng)性細(xì)胞最密集處，計(jì)數(shù)1個(gè)高倍視野(400倍)下陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)作為EBER陽(yáng)性細(xì)胞計(jì)數(shù)。②在陽(yáng)性細(xì)胞密集處，數(shù)10個(gè)高倍視野(400倍)下陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)，取其平均值作為EBER陽(yáng)性細(xì)胞計(jì)數(shù)。方法①計(jì)數(shù)方便快捷，方法②計(jì)數(shù)能較客觀地反映組織中EBER陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)，但是實(shí)際操作比較繁瑣耗時(shí)，適用于科學(xué)研究。在陽(yáng)性細(xì)胞分布不均的病例中，兩種方法計(jì)數(shù)結(jié)果可能有較大差別。各單位采用統(tǒng)一的計(jì)數(shù)方法，其結(jié)果才具有可比性。本共識(shí)建議在實(shí)際工作中，統(tǒng)一采用方法①進(jìn)行計(jì)數(shù)，并在病理報(bào)告中說(shuō)明采用的計(jì)數(shù)方法。
七、黏膜活檢組織中EBER陽(yáng)性的臨床意義
結(jié)腸黏膜EBER陽(yáng)性細(xì)胞一般為淋巴細(xì)胞。結(jié)腸黏膜活檢組織中EBER陽(yáng)性可見(jiàn)于炎癥性病變和腫瘤性病變，極少見(jiàn)于正常結(jié)腸黏膜組織。EBER陽(yáng)性的炎癥性病變多見(jiàn)于IBD患者合并EB病毒感染，腫瘤性病變則為EB病毒相關(guān)淋巴組織增殖性病變/淋巴瘤。
1．EBER陽(yáng)性腸道炎癥性病變：
該病變多見(jiàn)于IBD，尤其是UC，由于腸道局部炎癥刺激和免疫抑制劑的應(yīng)用，引起潛伏EB病毒的再激活。EBER陽(yáng)性的意義不能孤立地以EBER陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)進(jìn)行界定，需要綜合臨床表現(xiàn)、內(nèi)鏡特征、組織學(xué)特征，并參考外周血EB病毒DNA拷貝數(shù)進(jìn)行綜合分析。本共識(shí)建議將EBER的陽(yáng)性表達(dá)分為高表達(dá)、低表達(dá)和無(wú)臨床意義的非致病性潛伏感染3種類型。①EBER高表達(dá)：對(duì)于組織中有臨床意義的EBER陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)，目前尚鮮見(jiàn)文獻(xiàn)提出明確的陽(yáng)性界值，本共識(shí)建議暫定每高倍視野EBER陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)≥10作為EBER高表達(dá)的標(biāo)準(zhǔn)，需考慮EB病毒性腸炎。由于單純EB病毒性腸炎少見(jiàn)，該類情況多見(jiàn)于IBD合并EB病毒性腸炎(機(jī)會(huì)性感染)，其中UC合并EB病毒性腸炎多于CD合并EB病毒性腸炎。由于免疫抑制劑和生物制劑的使用，使局部免疫監(jiān)視下降，潛伏的EB病毒再激活，導(dǎo)致比IBD基礎(chǔ)改變更嚴(yán)重的黏膜損傷，包括內(nèi)鏡下表現(xiàn)的潰瘍與活動(dòng)性指標(biāo)升高，臨床表現(xiàn)為難治性IBD，多伴外周血EB病毒DNA拷貝數(shù)不同程度升高。組織學(xué)上常表現(xiàn)為潰瘍，多量淋巴細(xì)胞、漿細(xì)胞浸潤(rùn)，細(xì)胞一般無(wú)異型性(圖4)。②EBER低表達(dá)：每高倍視野EBER陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)<10，臨床意義難以單獨(dú)依靠EBER陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)確定，需要結(jié)合臨床綜合分析。若表現(xiàn)為IBD不能解釋的活動(dòng)性病變，或難治性IBD，則傾向IBD合并EB病毒性腸炎。若臨床和內(nèi)鏡下均為無(wú)明顯異常表現(xiàn)，則傾向非致病性潛伏感染。③EBER非致病性潛伏感染：EBER陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)為1～2個(gè)/高倍視野，全片僅個(gè)別陽(yáng)性細(xì)胞，多屬于無(wú)臨床意義的EB病毒非致病性潛伏感染。在炎癥等因素刺激下，局部出現(xiàn)EB病毒非特征性擴(kuò)增，外周血EB病毒DNA拷貝數(shù)無(wú)增高。組織學(xué)表現(xiàn)為黏膜固有層淋巴細(xì)胞、漿細(xì)胞數(shù)量正常或僅有輕度增多，細(xì)胞無(wú)異型性
