隨著新版WHO淋巴造血系統(tǒng)腫瘤新分類標(biāo)準(zhǔn)的普及和應(yīng)用,免疫表型分析在淋巴瘤分類診斷中成為必不可少的診斷依據(jù)。流式細(xì)胞分析技術(shù)(flow cytometry,F(xiàn)CM)檢測與其它免疫學(xué)方法相比具有更為迅速、準(zhǔn)確、多參數(shù)定量等優(yōu)勢,目前是惡性淋巴瘤診斷分類的必備常規(guī)手段之一。
1、B細(xì)胞淋巴瘤的分析
FCM是評(píng)估B細(xì)胞淋巴瘤的重要手段之一。通過檢測系列相關(guān)抗原表達(dá)可以辨識(shí)B淋巴細(xì)胞,通過檢測抗原的表達(dá)譜可以鑒別處于不同成熟階段和不同功能區(qū)的B淋巴細(xì)胞。成熟B細(xì)胞淋巴瘤的主要特征是具有免疫球蛋白輕鏈的限制性表達(dá)(又稱為單克隆性表達(dá)),或者正常的抗原喪失和異??乖某霈F(xiàn)等。B細(xì)胞淋巴瘤是B細(xì)胞的克隆性增生,瘤細(xì)胞表面免疫球蛋白輕鏈的表達(dá)僅限于一種(κ或λ)。而在良性B細(xì)胞增生時(shí),增生的B細(xì)胞來源于不同的B細(xì)胞克隆,會(huì)同時(shí)存在κ和λ的表達(dá)。因此,免疫球蛋白的限制性表達(dá)是FCM在絕大多數(shù)B細(xì)胞淋巴瘤分析中的重要指標(biāo)之一。然而,在前B細(xì)胞腫瘤和漿細(xì)胞腫瘤中沒有免疫球蛋白的表達(dá),并且在高度惡性的腫瘤中免疫球蛋白的表達(dá)也會(huì)減少甚至缺失,濾泡B細(xì)胞淋巴瘤也會(huì)出現(xiàn)表面輕鏈表達(dá)減弱或缺失的現(xiàn)象,因此免疫球蛋白輕鏈的限制性表達(dá)不是診斷淋巴瘤的絕對(duì)指標(biāo)。
2、T細(xì)胞淋巴瘤的分析
T細(xì)胞淋巴瘤的FCM分析具有更大的挑戰(zhàn)性。T細(xì)胞淋巴瘤的診斷指征有亞群限制性,正??乖磉_(dá)的缺失、異??乖磉_(dá)的出現(xiàn)和表達(dá)水平的異常等。正常T細(xì)胞由CD4陽性和CD8陽性T細(xì)胞組成,絕大多數(shù)T細(xì)胞淋巴瘤為CD4陽性T細(xì)胞。但T細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞要與反應(yīng)性T細(xì)胞群相鑒別。另外,在艾滋病、骨髓移植后或病毒感染情況下,也會(huì)出現(xiàn)CD8陽性T細(xì)胞占絕對(duì)優(yōu)勢的情況。T細(xì)胞淋巴瘤的另外一個(gè)重要的診斷指標(biāo)是不能表達(dá)某一廣譜T細(xì)胞抗原, 其中CD7的缺失最為常見,其他還包括CD2、CD5和CD3的缺失。部分T細(xì)胞腫瘤可以沒有異??乖谋磉_(dá),但存在細(xì)胞總量的增加。類似于B細(xì)胞淋巴瘤,T細(xì)胞淋巴瘤也可以存在克隆性增生。通過對(duì)T細(xì)胞受體基因重組多樣性的檢測,可以大大提高T細(xì)胞淋巴瘤診斷的準(zhǔn)確性。
3、FCM診斷的優(yōu)勢
淋巴瘤的傳統(tǒng)診斷是應(yīng)用形態(tài)學(xué)方法及免疫組化方法。FCM的興起是對(duì)淋巴瘤診斷和分型的重要補(bǔ)充。FCM能夠快速對(duì)大量細(xì)胞進(jìn)行多參數(shù)分析,因此FCM較免疫組化分析更為靈敏;另外,其對(duì)抗原表達(dá)強(qiáng)度的分析方面,也明顯優(yōu)于免疫組化,并可以有效地降低主觀性造成的偏差。
然而,F(xiàn)CM也存在局限性,例如需要新鮮標(biāo)本,形態(tài)學(xué)信息受限等,因此淋巴瘤的診斷仍需要將形態(tài)學(xué),免疫組化,F(xiàn)CM及分子生物學(xué)有效地結(jié)合。
FCM是評(píng)估B細(xì)胞淋巴瘤的重要手段之一。通過檢測系列相關(guān)抗原表達(dá)可以辨識(shí)B淋巴細(xì)胞,通過檢測抗原的表達(dá)譜可以鑒別處于不同成熟階段和不同功能區(qū)的B淋巴細(xì)胞。成熟B細(xì)胞淋巴瘤的主要特征是具有免疫球蛋白輕鏈的限制性表達(dá)(又稱為單克隆性表達(dá)),或者正常的抗原喪失和異??乖某霈F(xiàn)等。B細(xì)胞淋巴瘤是B細(xì)胞的克隆性增生,瘤細(xì)胞表面免疫球蛋白輕鏈的表達(dá)僅限于一種(κ或λ)。而在良性B細(xì)胞增生時(shí),增生的B細(xì)胞來源于不同的B細(xì)胞克隆,會(huì)同時(shí)存在κ和λ的表達(dá)。因此,免疫球蛋白的限制性表達(dá)是FCM在絕大多數(shù)B細(xì)胞淋巴瘤分析中的重要指標(biāo)之一。然而,在前B細(xì)胞腫瘤和漿細(xì)胞腫瘤中沒有免疫球蛋白的表達(dá),并且在高度惡性的腫瘤中免疫球蛋白的表達(dá)也會(huì)減少甚至缺失,濾泡B細(xì)胞淋巴瘤也會(huì)出現(xiàn)表面輕鏈表達(dá)減弱或缺失的現(xiàn)象,因此免疫球蛋白輕鏈的限制性表達(dá)不是診斷淋巴瘤的絕對(duì)指標(biāo)。
2、T細(xì)胞淋巴瘤的分析
T細(xì)胞淋巴瘤的FCM分析具有更大的挑戰(zhàn)性。T細(xì)胞淋巴瘤的診斷指征有亞群限制性,正??乖磉_(dá)的缺失、異??乖磉_(dá)的出現(xiàn)和表達(dá)水平的異常等。正常T細(xì)胞由CD4陽性和CD8陽性T細(xì)胞組成,絕大多數(shù)T細(xì)胞淋巴瘤為CD4陽性T細(xì)胞。但T細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞要與反應(yīng)性T細(xì)胞群相鑒別。另外,在艾滋病、骨髓移植后或病毒感染情況下,也會(huì)出現(xiàn)CD8陽性T細(xì)胞占絕對(duì)優(yōu)勢的情況。T細(xì)胞淋巴瘤的另外一個(gè)重要的診斷指標(biāo)是不能表達(dá)某一廣譜T細(xì)胞抗原, 其中CD7的缺失最為常見,其他還包括CD2、CD5和CD3的缺失。部分T細(xì)胞腫瘤可以沒有異??乖谋磉_(dá),但存在細(xì)胞總量的增加。類似于B細(xì)胞淋巴瘤,T細(xì)胞淋巴瘤也可以存在克隆性增生。通過對(duì)T細(xì)胞受體基因重組多樣性的檢測,可以大大提高T細(xì)胞淋巴瘤診斷的準(zhǔn)確性。
3、FCM診斷的優(yōu)勢
淋巴瘤的傳統(tǒng)診斷是應(yīng)用形態(tài)學(xué)方法及免疫組化方法。FCM的興起是對(duì)淋巴瘤診斷和分型的重要補(bǔ)充。FCM能夠快速對(duì)大量細(xì)胞進(jìn)行多參數(shù)分析,因此FCM較免疫組化分析更為靈敏;另外,其對(duì)抗原表達(dá)強(qiáng)度的分析方面,也明顯優(yōu)于免疫組化,并可以有效地降低主觀性造成的偏差。
然而,F(xiàn)CM也存在局限性,例如需要新鮮標(biāo)本,形態(tài)學(xué)信息受限等,因此淋巴瘤的診斷仍需要將形態(tài)學(xué),免疫組化,F(xiàn)CM及分子生物學(xué)有效地結(jié)合。